Eukaryontische Zellen können durch das angeborene Immunsystem zellfremde Substanzen wie zum Beispiel Lipopolysaccharide, bakterielle oder virale Nukleinsäuren und Proteine detektieren und gegen das Eindringen von potenziellen Pathogenen Abwehrmaßnahmen ergreifen. Darüber hinaus wird die Anwesenheit eventuell zellschädigender Substanzen den benachbarten Zellen über Botenstoffe mitgeteilt, die dementsprechend in eine Abwehrhaltung übergehen, ohne mit dem Pathogen in Kontakt gekommen zu sein.
Die Erkenntnis, dass auch die Lipofektion von den Abwehrmaßnahmen des angeborenen Immunsystems betroffen ist, führte zur Entwicklung des K2® Transfection Systems, das aus dem K2® Transfection Reagent und dem K2® Multiplier besteht. Das K2® Transfection Reagent basiert auf leistungsfähigen kationischen Lipiden (in Form von Liposomen), während der K2® Multiplier die Fähigkeit der Zellen verringert, Nukleinsäuren zu detektieren. Das K2® Transfection System stellt damit eine Weiterentwicklung des Transfektionsreagenzes METAFECTENE® PRO dar.
Auf diese Weise konnten in vielen Fällen erhebliche Steigerungen der Transfektionseffizienz gegenüber herkömmlichen Lipofektionsreagentien erzielt werden und zwar insbesondere bei der Transfektion mit DNA und mRNA. Das K2® Transfection System ist daher geeignet für die transiente und stabile Transfektion von Säugerzelllinien als auch primären Zellen mit DNA (Plasmide, Bacmide), RNA (mRNA, miRNA und siRNA) und modifizierten Nukleinsäuren (z.B. Antisense Oligonukleotide). Als Anwendungsbereiche sind besonders die Produktion von Proteinen, Antikörpern und Viren (z.B. Adenoviren, AAV, Lentiviren), Kotransfektionen verschiedener Nukleinsäuren, Genome Editing (z.B. CRISPR/Cas9, CRISPR/Cpf1) und Gene Silencing (Gene knockdown) zu nennen.
Das K2® Transfection System ist Bestandteil einer zeitlichen Entwicklungsreihe von Transfektionsreagenzien von Biontex, die insbesondere folgende Reagenzien umfasst: METAFECTENE® < METAFECTENE® PRO < K2® Transfection System < K4® Transfection System. Mit dem Entwicklungsgrad steigt die Wahrscheinlichkeit einer erfolgreichen Transfektion (siehe auch Allgemeine Auswahlhilfe).
Vergleichsstudien
DNA Transfektion
Vergleich der Transfektionseffizienzen von K2® Transfection System mit pCMV-Luc gegenüber einem handelsüblichen Transfektionsreagenz (L2k) und METAFECTENE® PRO unter jeweils optimierten Bedingungen:
Vergleich der Transfektionseffizienzen von K2® Transfection System mit pCMV-GFP gegenüber einem handelsüblichen Transfektionsreagenz (L2k) unter jeweils optimierten Bedingungen:
mRNA Transfektion
Vergleich der Transfektionseffizienzen von K2® Transfection System mit Luciferase codierender mRNA gegenüber METAFECTENE® PRO unter jeweils optimierten Bedingungen:
Vergleich der Transfektionseffizienzen von K2® Transfection System mit GFP codierender mRNA gegenüber METAFECTENE® PRO unter jeweils optimierten Bedingungen:
